纯培养方法比较简述

微生物纯种分离原理: 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征,可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。一般采用供给它适宜的培养条件(营养、PH、氧)或加入抑制剂(利于此菌而抑制其他菌生长)的方法淘汰不要的菌,再用稀释涂布平板法(或稀释混合平板法、平板划线分离法)得到纯菌株。  一、固体培养基分离 1、稀释倒平板法 特点:菌落分离较为均匀,进行微生物计数结果相对准确。但操作相对麻烦,热敏感菌有时易被烫死,而严格好氧菌也可能因被固定在琼脂中缺乏氧气而影响生长。 操作:①待分离材料逐级进行十倍稀释 ②取不同稀释液少许,与熔化且冷却**50℃左右的琼脂培养基混合 ③摇匀后,倒入无菌培养皿中 ④待琼脂凝固后,平板倒置在恒箱中培养。 保温培养一定时间,可能出现在平板表面的单个菌落,随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养。  2、涂布平板法 特点:操作相对简单,是较常使用的常规方法。但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开,进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意,否则不易得到准确的结果。 操作:①、待分离材料逐级进行十倍稀释 ②、稀释液放置在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上 ③、用无菌涂布棒把稀释液均匀地涂布在培养基表面上 ④、恒温培养 随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养。  3、平板划线法 特点:操作简单,多用于对已有纯培养的确认和再次分离。 应用:这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。并且,通过选用适当的选择平板及培养条件,可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合,上述3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。 操作:用无菌的接种环以无菌操作沾取少许待分离的培养物,在无菌的平板表面上进行划     线。当接种环在培养基表面上往后移动时,接种环上的菌液逐渐稀释,**后在所划的线上分散着单个细胞,经培养,每一个细胞长成一个菌落。  4、稀释摇管法 特点:稀释倒平板法的一种变通形式,但由于菌落形成在琼脂柱的中间,观察和挑取都相对困难。 应用:在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。 操作: 先将一系列的无菌琼脂培养基的试管加热,使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右,将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释,试管迅速摇动均匀,冷凝后,在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物,将培养基和空气隔开。培养后,菌落形成在琼脂柱的中间。进行单菌落的挑取和移植,需先用一只灭菌针将液体石蜡-石蜡盖取出,再用一根毛细管插入琼脂和管壁之间,吹入无菌无氧气体,将琼脂柱吸出,放置在培养皿中,用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。  二、液体培养基分离 .
稀释法 
特点:工作量大,是否获得纯培养需依靠统计学的推测,只能分离出混杂微生物群体中占数量优势的种类。 
应用:不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。 三、显微操作 
单细胞(孢子)挑取 特点:分离过程直观,可靠,但对仪器和操作技术要求较高,多限于高度专业化的科学研究。而挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物。 应用:从样品中直接分离所需的微生物细胞或孢子,获得其纯培养。 四、选择培养分离 
选择培养分离技术原理: 
如果某微生物生长需要是已知的,也可设计一套特定环境使之特别适合这种微生物的生长,因而能从自然界混杂的微生物群体中把这种微生物选择培养出来或抑制使大多数微生物不能生长,或造成有利于该菌生长的环境,经过一定时间培养后使该菌在群落中的数量上升,再通过平板稀释等方法对它进行纯培养分离。 
1、利用选择培养基进行直接分离:主要根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件 ,得到纯培养物。 2、富集培养 特点:一般不能直接获得微生物的纯培养,在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后,需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。  
原理:利用不同微生物间生命活动特点的不同,制定特定的环境条件,使仅适应于该条件的微生物旺盛生长,从而使其在群落中的数量大大增加,更易从自然界中分离到所需的特定微生物。  
例:采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程:    (1)首先配制以对羟基苯甲酸为**碳源的液体培养基,并分装于烧瓶中,灭菌后将少量的土壤样品接种于该液体培养基中,培养一定时间,原来透明的培养液会变得浑浊,说明已有大量微生物生长。 
(2)取少量上述培养液转移**新鲜培养液中重新培养,该过程经数次重复后能利用对羟基苯甲酸的微生物的比例在培养物中大大提高,将培养液涂布于以对羟基苯甲酸为**碳源的琼脂平板,得到的微生物菌落中的大部分都是能降解对羟基苯甲酸的微生物。 
(3)挑取一部分单菌落分别接种到含有及缺乏对羟基苯甲酸的液体培养基中进行培养,其中大部分在含有对羟基苯甲酸的培养基中生长,而在没有对羟基苯甲酸的培养基中表现为不生长,说明通过该富集程序得到了欲分离的目标微生物。